ХАРАКТЕРИСТИКА ВИБРАНИХ МЕТОДІВ, ВИКОРИСТОВУВАНИХ ПРИ ВИВЧЕННІ ВТОРИННИХ МЕТАБОЛІТІВ РОСЛИН

Тонкошарова хроматографія (ТШХ)

Метод заснований на здатності речовин з різною силою зв'язуватися з сорбентом. При цьому поділ відбувається в дуже тонкому шарі сорбенту, нанесеного на нейтральний носій. В якості сорбенту найчастіше використовують силікагель, оксид алюмінію або мікрокристалічна целюлоза, як підкладку - скло, алюмінієву фольгу або полімерну плівку [див .: 19, с. 50].

Перевагами даного методу є: відносна дешевизна, простота у виконанні, швидкість поділу. При проведенні ТШХ не потрібно такого складного і дорогого обладнання, як для деяких інших видів хроматографії.

Метод служить не тільки для якісного визначення складу досліджуваних сумішей, але і для кількісного визначення речовин. Вміст компонентів в пробі можна визначити як по площі плями, так і після елюювання речовин з області плями.

Ідентифікація індивідуального речовини проводиться за значенням Rf (коефіцієнт розподілу), специфічною флуоресценції або після специфічного фарбування.

Коефіцієнт розподілу - це величина, що характеризує ступінь зв'язування компонентів суміші з носієм. Експериментально її обчислюють як відношення відстані від лінії старту до середини плями досліджуваної речовини до відстані, пройденого фронтом розчинника. Цей коефіцієнт є індивідуальним для кожної речовини в певній системі розчинників і для конкретного сорбенту. Він може залежати від температури і вологості повітря, тому орієнтуватися тільки на Rf при ідентифікації речовин не можна. Обов'язковою є використання речовини (так званого свідка) і порівняння Rf отриманого для свідка дослідним шляхом, з табличним. При необхідності для речовин, що визначаються на хроматограмі, вносять поправки.

При застосуванні пластин, оброблених флуоресцентним барвником, речовини, які не флуоресцируют в ультрафіолетовому (УФ) світлі, можуть бути виявлені у вигляді темних плям на сяючому тлі.

Важливим удосконаленням, що підвищує ефективність аналізу хроматограмм, є застосування дензітометров - сканерів ТШХ-пластин, які дозволяють перетворити зображення хроматограми в криву на графіку, що дозволяє більш точно проводити кількісну оцінку досліджуваних компонентів.